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CRISPR/Cas12b系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2025-08-02
訪(fǎng)問(wèn)量：467
廠(chǎng)商性質(zhì)：其他
一、分子機(jī)制與結(jié)構(gòu)特性
（一）系統(tǒng)定義與分類(lèi)
CRISPR/Cas12b（原稱(chēng) C2c1）屬于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系統(tǒng)，是繼 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因編輯工具。其核心特征包括：
雙 RNA 引導(dǎo)機(jī)制：
需 crRNA 與 tracrRNA（可融合為 sgRNA）共同引導(dǎo)靶向切割，兼具 Cas9 與 Cas12a 的部分特性 。
切割模式：
單一 RuvC 結(jié)構(gòu)域 切割雙鏈 DNA，形成 5-6 nt 的黏性末端（5' 突出），利于同源重組修復(fù)（HDR）。
PAM 識(shí)別：
依賴(lài) T-rich PAM 序列（如 5'-TTN-3'），擴(kuò)展了 AT 富集基因組的編輯能力 。
（二）結(jié)構(gòu)優(yōu)勢(shì)
| 特性 | Cas12b | 對(duì)比 Cas9/Cas12a |
|---|---|---|
| 蛋白大小 | 約 1,100 氨基酸（最?。?/td> | 比 Cas9（1,600 aa）和 Cas12a（1,300 aa）更小 |
| RNA 需求 | 需 crRNA + tracrRNA（可融合為 sgRNA） | 比 Cas12a（僅需 crRNA）復(fù)雜，但比 Cas9 簡(jiǎn)化 |
| 熱穩(wěn)定性 | 溫度敏感型（40–55℃激活） | 需工程化改造以適配哺乳動(dòng)物細(xì)胞 |
二、技術(shù)優(yōu)勢(shì)與性能
（一）核心優(yōu)勢(shì)
低脫靶率：
GUIDE-seq 檢測(cè)顯示脫靶率 顯著低于 Cas9（錯(cuò)誤插入/缺失減少 >50%）。
高特異性：
crRNA 引導(dǎo)序列更長(zhǎng)（>42 nt），靶向精度更高 。
編輯模式：
誘導(dǎo) 純插入突變率低，更傾向于產(chǎn)生小片段缺失，減少功能不可預(yù)測(cè)性 。
病毒載體適配性：
小分子量更易包裝進(jìn) AAV 或慢病毒載體，提升體內(nèi)遞送效率 。
（二）與同類(lèi)系統(tǒng)對(duì)比
| 參數(shù) | Cas12b | Cas9 | Cas12a |
|---|---|---|---|
| PAM 序列 | 5'-TTN-3'（T 富集） | 5'-NGG-3'（G 富集） | 5'-TTTV-3'（T 富集） |
| 切割末端 | 黏性末端（5' 突出） | 平末端 | 黏性末端（5' 突出） |
| 反式切割活性 | ? 無(wú) | ? 無(wú) | ? 有（可切割 ssDNA） |
| 多基因編輯 | 需多 sgRNA | 需多 sgRNA | ? 支持 crRNA 陣列 |
注：Cas12b 切割模式使其在 基因治療 中避免產(chǎn)生新表位，降低免疫風(fēng)險(xiǎn) 。
三、應(yīng)用場(chǎng)景與前沿案例
（一）生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用
抗病毒治療：
HIV ：在 T 細(xì)胞中單次編輯即可清除全部傳染性 HIV，效率優(yōu)于 Cas9 。
遺傳病修復(fù)：
聯(lián)合 HDR 通路實(shí)現(xiàn) β-地中海貧血基因精準(zhǔn)修復(fù)，血紅蛋白恢復(fù)至正常水平 。
腫瘤免疫：
編輯 PD-1/CTLA-4 雙靶點(diǎn)，降低 CAR-T 細(xì)胞耗竭 。
