ELISA檢測樣本包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本,靈敏度*。
◆注意事項:
在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在49C備用,如有特殊原因需要周期收集標本，請造模取材后,將標本及時分裝后放在20℃或70°C條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。
ELISA檢測液體類標本:
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)1分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA.檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右( 200-3000轉(zhuǎn)1分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水.
腦脊液參照此實行。
細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右( 200-3000轉(zhuǎn)1分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS , PH7.4。用液氬迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8*C的溫度。加入一定量的PBS (PH7.4) , 用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。