分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建

簡要描述：

分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建：分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再從篩選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。

更新時(shí)間：2024-09-26

訪問量：2109

廠商性質(zhì)：其他

在線詢價(jià) 聯(lián)系我們

產(chǎn)品介紹

分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建

一、實(shí)驗(yàn)原理

分子克隆，又稱DNA克隆，是指通過生物技術(shù)手段，將特定的DNA片段（基因）在體外進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)增，從而得到大量與其wanquan相同的DNA拷貝的過程。這一技術(shù)基于DNA的重組原理，主要步驟包括：

?目的基因的獲取?：通過PCR擴(kuò)增、基因文庫篩選、化學(xué)合成等方法獲取感興趣的DNA片段（即目的基因）。
?載體的選擇?：選擇合適的載體分子，如質(zhì)粒、病毒DNA等，用于攜帶和擴(kuò)增目的基因。
?DNA連接?：使用DNA連接酶將目的基因與載體DNA分子進(jìn)行連接，形成重組DNA分子。
?轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染?：將重組DNA分子導(dǎo)入到宿主細(xì)胞（如細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞等）中，使其能夠在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和表達(dá)。
?篩選與鑒定?：通過特定的篩選方法（如抗生素抗性篩選、PCR鑒定、測序等）從大量細(xì)胞中篩選出含有重組DNA的細(xì)胞，并進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定和驗(yàn)證。

質(zhì)粒載體構(gòu)建

質(zhì)粒載體構(gòu)建是分子克隆中的關(guān)鍵步驟之一，它涉及到將目的基因插入到質(zhì)粒DNA中，形成重組質(zhì)粒。質(zhì)粒是一種小型環(huán)狀DNA分子，廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞中，能夠自主復(fù)制并在細(xì)菌間傳遞。質(zhì)粒載體構(gòu)建的主要步驟包括：

?目的片段的獲取?：通過PCR擴(kuò)增、基因合成等方法獲取目的DNA片段。
?質(zhì)粒載體的準(zhǔn)備?：選擇合適的質(zhì)粒載體，并通過適當(dāng)?shù)拿盖刑幚肀┞冻鲳ば阅┒耍员阌谂c目的片段連接。
?DNA連接?：使用DNA連接酶將目的片段與質(zhì)粒載體進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒。
?轉(zhuǎn)化?：將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到感受態(tài)細(xì)胞中（如大腸桿菌），通過熱激、電穿孔等方法使質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞。
?篩選與鑒定?：通過抗生素抗性篩選、PCR鑒定、測序等方法篩選出含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞，并進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定和驗(yàn)證。

二、實(shí)驗(yàn)流程

目的DNA的擴(kuò)增和純化；

連接反應(yīng)；

電泳檢測連接產(chǎn)物。

三、客戶提供

樣本DNA，基因序列，試劑盒。

四、公司提供

構(gòu)建好的載體，電泳膠圖，測序結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)周期：大約1-2月。

分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建